Διάκριση τριών ειδών του γόνου κεφαλοειδών με την χρήση του 5SrDNA δείκτη

Abstract

Η παρούσα εργασία πραγματεύεται τη διάκριση τριών ειδών της οικογένειας Mugilidae με τη βοήθεια της γενετικής μηχανικής. Τα είδη στα οποία πραγματοποιήθηκε η γενετική ταυτοποίηση είναι: Mugil cephalus (Linnaeus, 1758), Liza ramada (Risso, 1826) και Liza haematocheilus (Temminck & Schlegel, 1845). Το δείγμα αλιεύθηκε από το Θερμαϊκό κόλπο και τη λιμνοθάλασσα της Βισθωνίδας, σε διαφορετικές χρονικές περιόδους. Αφού πρώτα έγινε η συστηματική αναγνώριση των ειδών βάσει κλείδας, αμέσως μετά περάσαμε στη διαδικασία της μεταφοράς και της συντήρησης των δειγμάτων στο εργαστήριο η οποία έγινε σε συνθήκες κατάψυξης. Στη συνέχεια ακολούθησε η διαδικασία της λήψης το μυϊκού ιστού από τη ραχιαία περιοχή των ατόμων, η εξαγωγή του DNA, και ο έλεγχος του DNA σε πηκτή αγαρόζης με τη βοήθεια υπεριώδους ακτινοβολίας. Το επόμενο βήμα ήταν η ενίσχυση του γονιδίου 5S rDNA με τη μέθοδο της PCR και ο έλεγχος των προϊόντων PCR σε πηκτή αγαρόζης. Τα διαφορετικά προϊόντα PCR τα φωτογραφίσαμε ώστε να γίνει η σύγκριση των αποτελεσμάτων. Το γονίδιο 5S rDNA αποδείχθηκε ένας άριστος μάρτυρας λόγω της γρήγορης, και επιτυχημένης ενίσχυσης και στα τρία είδη. Η αξιοπιστία της μεθόδου οφείλεται στη σταθερότητα των αποτελεσμάτων. Το αποτύπωμα των ατόμων του είδους M. cephalus αποτελούνταν από δύο ζώνες μεγέθους 220 ζευγών βάσεων και 440 ζευγών βάσεων. Τα άτομα του είδους L. ramada έδωσαν μόνο μια ζώνη μεγέθους 220 ζευγών βάσεων ενώ τα άτομα του είδους L. haematocheilus έδωσαν τρεις ζώνες μεγέθους 280 ζευγών βάσεων, 600 ζευγών βάσεων και 620 ζευγών βάσεων. Επομένως, τα τρία είδη μπορούν να διακριθούν με μία απλή αντίδραση PCR του γονιδίου 5S rDNA, εφόσον παρουσιάζουν ένα μοναδικό πρότυπο στη πηκτή αγαρόζης. Στόχος της εργασίας ήταν η διάκριση των τριών ειδών κεφαλοειδών (Μugil cephalus, Liza ramada και Liza haematocheilus), με την ενίσχυση του 5S rDNA γονιδίου. Με τη διαδικασία της αλυσιδωτής αντίδρασης της πολυμεράσης (PCR) ενισχύσαμε το συγκεκριμένο γονίδιο και τα προϊόντα της αντίδρασης PCR ήταν μοναδικά για το κάθε είδος. Με την παραπέρα εφαρμογή της τεχνικής αυτής οι ιχθυοκαλλιεργητές θα μπορούν να είναι σίγουροι για το είδος του γόνου με το οποίο γεμίζουν τις δεξαμενές τους.